一抗、二抗、内参抗体、标签抗体的区别？

日期：2024-12-10 11:21:59

1、一抗（Primary Antibody）

定义：一抗是能特异性识别并结合目标抗原的抗体。例如，在检测细胞中的某种特定蛋白时，一抗的抗原结合位点能够精准地与该蛋白结合。

来源：可以是单克隆抗体或多克隆抗体。单克隆一抗是由单一的 B 淋巴细胞克隆产生的抗体，能识别抗原上的一个特定表位，特异性非常高；多克隆一抗则是由多种 B 淋巴细胞针对抗原的不同表位产生的抗体混合物，能识别抗原的多个表位，亲和力相对较高。

应用场景：在免疫组化IHC、免疫荧光IF、免疫印迹WB等实验技术中广泛使用。比如在 WB 实验中，一抗与经过电泳分离并转印到膜上的目标蛋白结合，是检测目标蛋白的关键试剂。

2、二抗（Secondary Antibody）

定义：二抗是能特异性识别一抗的抗体。它本身不直接与目标抗原反应，而是与一抗的 Fc 段结合。例如，如果一抗是小鼠来源的，相应的二抗可以是抗小鼠 IgG 的抗体。

来源：通常是通过免疫动物（如山羊、驴等）产生的，用一种动物的抗体（一抗）作为抗原去免疫另一种动物，得到针对第一种动物抗体的抗体（二抗）。

应用场景：二抗主要用于信号放大和检测。因为二抗上通常会标记有可以检测的标记物，如辣根过氧化物酶（HRP）、荧光素（如 FITC、Cy3 等）等。在 WB 实验中，标记 HRP 的二抗与一抗结合后，通过化学发光底物显色可以使目标蛋白条带显现；在 IF 实验中，标记荧光素的二抗使目标蛋白在荧光显微镜下可见。而且，由于一个一抗可以结合多个二抗，从而起到信号放大的作用。

3、内参抗体（Loading Control Antibody）

定义：内参抗体是用于检测内参蛋白的抗体。内参蛋白是在细胞或组织中稳定表达的蛋白，其表达量通常不受实验处理因素的影响，例如 β - 肌动蛋白（β - actin）、甘油醛 - 3 - 磷酸脱氢酶（GAPDH）等。

来源：和一抗的来源类似，有单克隆和多克隆之分，通过免疫动物获得能够识别内参蛋白的抗体。

应用场景：在 WB 等实验中，用于校正上样误差。因为在样本处理过程中，可能会出现蛋白上样量不一致的情况。通过检测内参蛋白的表达量，可以将目标蛋白的表达量进行归一化处理。例如，在比较不同样本中目标蛋白表达差异时，用目标蛋白条带的灰度值除以内参蛋白条带的灰度值，就可以得到相对准确的表达量变化情况。

4、标签抗体（Tag - specific Antibody）

定义：标签抗体是能够识别融合蛋白上标签序列的抗体。在基因工程中，常常将目标蛋白与一些特定的标签（如 His - tag、Flag - tag、Myc - tag 等）融合表达，方便后续的蛋白纯化和检测。

来源：也是通过免疫动物产生，用标签蛋白作为抗原免疫动物得到能够识别标签的抗体。
应用场景：在蛋白纯化过程中，例如利用镍柱亲和层析纯化带有 His - tag 的蛋白时，标签抗体可以用于检测蛋白是否成功表达以及表达量的情况；在检测融合蛋白在细胞内的定位（如通过免疫荧光实验）或者相互作用时，标签抗体也发挥重要作用。