ROR1药物研发热潮：默沙东与石药集团的临床试验新动态

1. 什么是ROR1？

ROR1是受体酪氨酸激酶样孤儿受体（ROR）家族成员之一，属于I型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。与核受体中的ROR家族不同，ROR是一类膜受体。它们与家族中的原肌球蛋白激酶受体家族(tropomyosin-related kinase, Trk)、骨骼肌特异性酪氧酸激酶样受体家族(muscle specific knase, MuSK)和神经营养因子酯氨酸激酶受体家族(neurotrophic tyrosine kinase receptor, NT-RTK)关系密切，由于ROR蛋白最初发现时配体未知，所以被定义为孤儿受体 ^[3]。

ROR家族的另一个成员是ROR2，ROR1与ROR2氨基酸序列的同源性达58%。其中ROR1又含有2种亚型：完整的细胞膜受体型ROR1以及截短型变异体。截断型变异体主要分为无胞外结构的膜结合型ROR1I与只含胞外结构的可溶型ROR1 ^[4]。可溶型ROR1的表达在正常人与肿瘤患者中并无差异，血清中的表达量很低或者检测不到，且与疾病的进展和严重程度无关，而完整结构的膜结合型ROR1在多种肿瘤组织特异性高水平表达 ^[5]。后文中所提到的ROR1都是指完整结构的膜结合型ROR1。

2. ROR1的结构与功能

ROR1是一种跨膜受体酪氨酸激酶蛋白。ROR1编码基因共2814bp，位于染色体1p31.3。ROR1膜蛋白由937个氨基酸组成，分子量约105 kDa。ROR1结构在生物种间高度保守，如人与鼠的ROR1氨基酸序列同源性可达97%。如图1所示，人源ROR1由一个胞外的免疫球蛋白样结构域(Ig)、两个富含半胱氨酸的结构域(FZD)、近膜kringle结构域、单次跨膜结构以及一个胞内酪氨酸激酶结构域（TKD）、两个丝/苏氨酸富集结构域(S/TRD)和一个脯氨酸富集结构域（PRD）组成 ^[6]。

图1. The structure of ROR1

*图片参考文献发表在Protein Cell上^[6]。

免疫球蛋白样结构域和半胱氨酸富集结构域与ROR1结合配体的功能相关。其中FZD结构域由10个保守的半胱氨酸残基和5个相应的二硫键组成。FZD结构还见于平滑肌家族受体（如Smo）、卷曲家族受体（如sFRP）、金属羧肽酶Z（CPZ）、collagen α1 XVIII和低密度脂蛋白受体相关蛋白 (LRP)。这些蛋白大都可以结合Wnt蛋白并参与Wnt通路的信号转导。目前大量研究己经证实ROR1也是通过FZD结合Wnt5a并激活非经典Wnt信号通路 ^{[7] [8]}。 Kringle结构域在ROR家族中比较保守，由80个氨基酸组成 ^[9]。其结构特点是含有三个由二硫键形成的环状结构，这三个环状结构也参与了ROR受体识别Wnt蛋白的过程。

ROR的酪氨酸激酶结构域在生物体高度保守，和Trk、MuSK的酪氨酸激酶结构域极其相似。但ROR1蛋白在这段高度保守的区域内存在某些氨基酸序列的改变,提示其胞内激酶活性有可能发生改变。丝/苏氨酸、脯氨酸富集结构域是由丝/苏氨酸富集结构域、脯氨酸富集结构域、丝/苏氨酸富集结构域三个结构域串联而成。该区域存在潜在的磷酸化位点、与下游信号传导有关。

3. Wnt5a/ROR1与肿瘤

目前关于ROR1信号传导的主流说法是，ROR1可通过介导非经典Wnt信号通路（non-canonical Wnt pathways）的信号传递，在多种生理过程中发挥重要作用，其中包括调节细胞分裂、增殖、迁移、和细胞趋化，尤其是Wnt5a。Wnt5a是典型的非经典Wnt信号通路的激活因子，参与NF-κB亚基p65的磷酸化，激活肿瘤细胞中NF-κB通路，促进细胞迁移和侵袭，EMT、癌转移等。接下来，我们具体了解下ROR1是如何通过Wnt5a信号通路激活肿瘤细胞的。

Wnt5a/ROR1在多种癌症中的高度表达。作为Wnt5a的受体，ROR1参与激活肿瘤细胞NF-κB通路。NF-κB通路是炎症反应和免疫调控的掌舵者，在多种肿瘤类型中组成性激活。如图2所示，Wnt5a激活受体ROR1或FZD5，导致Dvl2/3激活和Akt磷酸化。Akt继而促进IKKα磷酸化激活IKK复合体，IKK复合体负责IκBα降解和NF-κB亚基p65的磷酸化。磷酸化的p65转移到细胞核促进包括Wnt5a在内的靶基因转录表达。Wnt5a的分泌又促进新一轮的自主反馈循环。自主反馈循环ROR1/Akt/p65通路的激活会进一步促进促炎因子（如IL-6）和趋化因子（如CCL2）的分泌。

图2. The diagram of Wnt5a/ROR1 signaling

此外，有多项研究已将ROR1的表达与YAP / TAZ转录的激活相关联，从而增强肿瘤发生和化学耐药性 ^{[10] [11]}。如图3所示，Wnt5a与ROR1 / FZD复合物的结合，然后通过结合Gα12/13进一步激活RhoA，从而抑制Lats1/2活性，进而导致YAP / TAZ去磷酸化和核易位。易位到细胞核里的YAP/TAZ与TEAD结合后可以诱导涉及细胞增殖、干细胞自我更新和肿瘤发生基因的转录。增加的YAP/TAZ转录反过来又可以上调ROR1表达。

图3. Crosstalk between Wnt5a-ROR1 signaling and YAP/TAZ pathway

*图片参考文献发表在Cells上^[12]。

4. 靶向ROR1的临床意义

ROR1靶向药物的研究正在迅速发展，高达90多款临床药物在研，涉及多种药物类型和治疗机制，主要包括CAR-T细胞疗法、ADC药物、单克隆抗体等。

CAR-T药物：以ONCT - 808和JCAR 024为例，通过基因工程技术对患者自身的T细胞进行改造，使其表面表达能够特异性识别ROR1的嵌合抗原受体（CAR）。当回输到患者体内后，这些CAR - T细胞能够精准识别并结合肿瘤细胞表面的ROR1，从而激活T细胞的杀伤功能，直接对肿瘤细胞发动免疫攻击，引发肿瘤细胞凋亡。

ADC药物：如MK - 2140这类ADC药物，由靶向ROR1的人源化IgG1单克隆抗体、可裂解连接子以及毒性载荷（如单甲基澳瑞他汀E，MMAE）组成。药物首先通过抗体部分与肿瘤细胞表面的ROR1特异性结合，随后被肿瘤细胞内吞进入细胞内部。在细胞内，连接子在特定酶的作用下发生裂解，释放出毒性载荷MMAE，MMAE作为微管蛋白抑制剂，可干扰肿瘤细胞的微管功能，进而抑制细胞有丝分裂，最终导致肿瘤细胞死亡。

单抗药物：如ZILO-301（Zilovertamab）是一种人源化单克隆抗体，特异性地靶向ROR1。它能够精确地识别并结合肿瘤细胞表面的ROR1受体。这种结合可能会触发机体自身的免疫反应。比如，激活补体系统，诱导补体依赖的细胞毒性（CDC）作用，或者通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）机制，使免疫细胞（如自然杀伤细胞等）识别并杀伤肿瘤细胞。

这些药物主要针对ROR1在肿瘤细胞中的异常高表达，涵盖了血液系统恶性肿瘤（如白血病、淋巴瘤等）以及实体瘤（如乳腺癌、肺癌、结直肠癌等），有望为不同类型肿瘤患者提供新的治疗策略。多家机构，包括Oncternal Therapeutics、默沙东、勃林格殷格翰等，正在积极推动这些药物的研发，最高阶段已处于临床3期，预示着ROR1靶向药物有望在不久的未来上市，为肿瘤精准治疗带来重大突破，为癌症患者提供新的治疗选择。

临床研究表部分展示：

为鼎力协助各药企针对ROR1靶点在白血病和肿瘤等药物方面的研发工作，CUSABIO推出ROR1活性蛋白产品（Code: CSB-MP020067HU1d7），助力您在ROR1机制方面的研究或其潜在临床价值的探索。