一种可用于多重连接依赖的扩增技术的长探针的制备方法

背景：2002年荷兰科学家发明了一种名为多重连接依赖的扩增技术（muitiplex ligation-dependent probe amplication,MLPA）的高通量基因检测方法，可在同一反应管内对多达45种不同的核苷酸序列进行检测和定量分析。至今，MLPA技术已应用于很多领域，如单核苷酸多态性和基因突变检测、基因片段缺失和重复、染色体数目异常、基因甲基化检测及mRNA分析等等。在该方法中涉及到长探针和短探针，其中长探针的制备是难点。

方法改进：采用PCR方法结合亲和素磁珠法制备（long oligonucleotide preparation by magenetic-beads，LOPM）可用于多重连接依赖的扩增技术的长探针。通过针对目标序列和用于制备长探针的与待检测靶片段无关的模板UT（Unrelated Template，UT），如质粒等设计进行PCR扩增的引物，其中的一个引物标记进行生物素标记，以质粒为模板进行PCR扩增，获得特异长度的生物素标记的核酸序列，利用亲和素磁珠进行纯化，最终制备长度特异的单链寡核苷酸（非生物素标记）。利用亲和素磁珠法制备MLPA长探针的方法如图1。

结果：采用PCR方法结合亲和素磁珠法制备可用于多重连接扩增技术的长探针能根据实验需求制备任意长度的长探针，不仅大大降低了探针设计的难度，同时避免了噬菌体培养和双酶切等耗时长、成本高等复杂的操作过程，使得普通的实验室也能顺利进行MLPA检测实验。