替代PCR，RPA检测埃博拉等致命病毒

重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术（由英国公司TwistDx Inc开发）。以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。

RPA检测疟原虫核酸扩增是目前最灵敏的疟原虫（P. falciparum）特异性检测法。然而，PCR需要热循环设备和专业性操作，资源匮乏的地区往往难以满足这些条件。在这种情况下，与侧流层析结合的RPA有着很大的应用前景。

《Malaria Journal》杂志今年三月份发表的一项研究中，研究人员将RPA基础反应、TwistAmp nfo探针和侧流层析结合起来，实现了疟原虫18S rRNA基因的高灵敏度快速检测。在38°C的条件下，只需要不到十分钟的扩增，就能检出含有四个疟原虫的样本。加上侧流层析的检测时间，整个流程总共只需要15分钟，而且肉眼可以直接看到检测结果。

研究人员用不同疟原虫测试了这种方法的灵敏度和特异性。研究显示，所有疟原虫都被成功检出，所有非疟原虫都得出了阴性结果。文章指出，这一方案将大大改善资源匮乏地区的疟原虫分子诊断。

RPA检测埃博拉等十种致命威胁检测传染性疾病的综合panel，有助于资源匮乏地区进行实地分子诊断，对生物防御工作也有很大的帮助。

《Journal of Clinical Microbiology》杂志去年四月的一项研究开发了一个RPA检测panel，对土拉弗朗西斯氏菌（Francisella tularensis）、鼠疫耶尔森氏菌（Yersinia pestis）、炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）、天花病毒进行RPA分析，对裂谷热病毒（Rift Valley fever virus）、埃博拉病毒、Sudan病毒和马尔堡病毒进行RT-RPA分析。研究显示，这些RPA和RT-RPA的分析灵敏度大多在16-21个分子之间（与实时PCR相当），42°C下只需运行6-10分钟，而且不存在交叉反应。

RPA检测冠状病毒2012年在中东首次鉴定的中东呼吸综合症冠状病毒( Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)是一种新型的冠状病毒。这种病毒很快传入了欧洲，给公共安全机构敲响了警钟。

目前，MERS-CoV检测主要依赖于实时RT-PCR，需要收集患者样本然后到专门的实验室去检验。因此，亟需能够进行实地检测的快速装置。

《PLOS Currents：Outbreaks》去年十二月发表的一项研究，开发了一个能在3-7分钟内鉴定MERS-CoV的便携式RT-RPA装置。在42°C条件下，等温MERS-CoV RT-RPA与实时RT-PCR一样敏感，可检出10个RNA分子。文章指出，这个便携装置是监控MERS-CoV传播，寻找其动物宿主的理想方法。

除此之外，世界各地的研究者们近期还用RPA技术检测了许多其他的病毒。比如南美对虾浓核症病毒、对虾白斑综合症病毒、李痘病毒、樱桃小果病毒2、黄热病毒、牛冠状病毒、施马伦贝格病毒、牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫病毒等等。RPA甚至还被用来直接检验尿液中的沙眼衣原体。